KIAA1731 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406955

概要

CEP295（KIAA1731）は、中心小体の形成と中心体の成熟に必須の中心体タンパク質をコードし、周中心体物質（PCM）の形成および微小管形成中心（MTOC）としての適切な機能を支えます。中心小体から中心体への変換（centriole-to-centrosome conversion）、中心体の複製、そして有糸分裂における正確な紡錘体形成を協調させる過程に関与することで、ゲノムの安定性に寄与します。CEP295依存的な中心体の完全性が損なわれると、有糸分裂の進行異常や染色体不安定性を引き起こし得ます。これらはがん生物学で頻繁に研究される細胞状態です。さらにCEP295は、中心体の欠陥がシグナル伝達のダイナミクスや分化プログラムに影響し得ることから、繊毛形成（ciliogenesis）や細胞周期制御の研究においても重要です。

KIAA1731 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCEP295遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CEP295内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CEP295のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIAA1731タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIAA1731シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CEP295欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIAA1731の機能に不可欠なCEP295エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CEP295ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIAA1731 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKIAA1731 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CEP295遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIAA1731 HDRプラスミド（h）および KIAA1731 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCEP295ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCEP295標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。