KChIP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403327-ACT

KCNIP2 は、神経型カルシウムセンサータンパク質である KChIP2 をコードしています。KChIP2 は EF ハンド型の Ca2+ 結合性補助サブユニットで、Kv4 ファミリーの A 型電位依存性カリウムチャネルを調節します。チャネルのゲーティングや細胞膜表面での発現量を調整することで、KChIP2 は心臓や神経系を含む興奮性組織において、膜興奮性、活動電位の再分極、Ca2+ 依存的シグナル伝達に影響を与えます。KCNIP2/KChIP2 の発現変化は、電気的リモデリングや不整脈感受性との関連が報告されており、神経の興奮性やストレス応答性の転写プログラムという文脈でも研究されています。これらの特性により、KCNIP2 はイオンチャネル制御、カルシウム依存的タンパク質間相互作用、電気生理学に関連する経路を解析するうえで有用な標的（ノード）となります。

KChIP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KCNIP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KChIP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KCNIP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKCNIP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KChIP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKCNIP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKChIP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKCNIP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKChIP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。