Junctophilin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409301

Panoramica

JPH3 codifica la giuncofilina-3, una proteina ponte di membrana che stabilizza i complessi di membrana giunzionali collegando la membrana plasmatica al reticolo endoplasmatico/sarcoplasmatico. Nei neuroni, la giuncofilina-3 supporta microdomini localizzati di Ca²⁺ e l’accoppiamento eccitazione–contrazione/eccitazione–secrezione organizzando contatti che influenzano la segnalazione del Ca²⁺, l’eccitabilità di membrana e la funzione sinaptica. Questi processi si intrecciano con vie che controllano l’omeostasi del calcio intracellulare, la segnalazione del RE e le risposte dipendenti dall’attività. L’alterazione o la deregolazione dell’espressione di JPH3 è stata associata a fenotipi neurodegenerativi, inclusa la malattia tipo Huntington 2, rendendolo rilevante per lo studio della vulnerabilità calcio-dipendente e della disfunzione neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene JPH3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del JPH3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto JPH3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Junctophilin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di JPH3 per lo studio della segnalazione di Junctophilin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni JPH3 critici per la funzione di Junctophilin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di JPH3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Junctophilin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Junctophilin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus JPH3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Junctophilin-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Junctophilin-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia JPH3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio JPH3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.