Junctophilin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409301
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Junctophilin-3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Junctophilin-3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Junctophilin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-409301 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O JPH3 codifica a junctofilina-3, uma proteína que faz a ponte entre membranas e estabiliza complexos de membrana juncionais ao ancorar a membrana plasmática ao retículo endoplasmático/retículo sarcoplasmático. Em neurônios, a junctofilina-3 sustenta microdomínios localizados de Ca²⁺ e o acoplamento excitação–contração/excitação–secreção ao organizar contatos que influenciam a sinalização de Ca²⁺, a excitabilidade da membrana e a função sináptica. Esses processos se cruzam com vias que controlam a homeostase do cálcio intracelular, a sinalização do RE e respostas dependentes de atividade. A disrupção ou alteração da expressão de JPH3 tem sido associada a fenótipos neurodegenerativos, incluindo a doença semelhante à de Huntington tipo 2, tornando-o relevante para estudar a vulnerabilidade dependente de cálcio e a disfunção neuronal.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene JPH3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do JPH3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do JPH3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Junctophilin-3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de JPH3 para a investigação da sinalização de Junctophilin-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) JPH3 críticos para a função Junctophilin-3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos JPH3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Junctophilin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Junctophilin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus JPH3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Junctophilin-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Junctophilin-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia JPH3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo JPH3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.