JAB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424107-ACT

O gene Cops5 de camundongo codifica JAB1/CSN5, a subunidade desneddilase cataliticamente ativa do signalossoma COP9, que regula ligases de ubiquitina do tipo cullin-RING e a proteostase. Ao controlar a remoção de NEDD8 das cullinas, JAB1 modula a degradação dependente de ubiquitina de reguladores-chave do ciclo celular e de sinalização, influenciando a proliferação, as respostas a dano no DNA e programas adaptativos ao estresse. JAB1 também interage com redes de controle transcricional e de transdução de sinais, incluindo vias ligadas à atividade de AP-1 e à sinalização responsiva a citocinas. A atividade desregulada de CSN5/JAB1 tem sido associada a crescimento celular aberrante e instabilidade genômica na biologia do câncer, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica e homeostase proteica.

JAB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cops5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JAB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cops5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cops5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JAB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cops5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JAB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JAB1 em células tumorais com expressão de Cops5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.