ITF-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402815

概要

TCF4は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子ITF-2（E2-2としても知られる）をコードしている。ITF-2はDNA結合性の調節因子であり、E-boxモチーフの認識や他のbHLHタンパク質との二量体形成を介して、系統特異的な遺伝子発現プログラムを調節する。ITF-2は、細胞分化・増殖・発生パターニングを制御する転写ネットワークに関与し、細胞運命決定やクロマチン依存的な遺伝子制御を形作る経路とも交差する。TCF4活性の異常は神経発生生物学や免疫細胞の系譜決定と関連づけられており、ITF-2による転写制御の変化は、発達障害や悪性腫瘍に伴う転写プログラムの再配線など、疾患に関係する表現型と関連している。状況依存的な制御因子として、TCF4は多様なヒト細胞モデルにおいて、遺伝子発現ダイナミクス、エンハンサー活性、ならびに下流経路の出力を制御する役割の観点から、しばしば研究されている。

ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTCF4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TCF4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TCF4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ITF-2/TCF4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ITF-2/TCF4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TCF4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ITF-2/TCF4の機能に不可欠なTCF4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TCF4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TCF4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ITF-2/TCF4 HDRプラスミド（h）および ITF-2/TCF4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTCF4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTCF4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。