IRS-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402033

概要

インスリン受容体基質4（IRS4）は、活性化したインスリン受容体およびインスリン様成長因子受容体を下流のシグナル伝達ネットワークへとつなぐ細胞質アダプタータンパク質です。PI3K–AKT–mTOR経路およびRAS–MAPK経路の活性化を促進する相互作用を介して、IRS-4は細胞増殖、代謝、生存に影響を及ぼし、他のIRSファミリー分子とは異なる文脈依存的な役割を担います。IRS4の発現やシグナル伝達の変化は、がん生物学における増殖因子シグナルの破綻や、より広範な代謝シグナル表現型と関連付けられており、受容体型チロシンキナーゼ間のクロストークを解明する上で重要です。IRS-4の研究は、シグナル伝達ダイナミクス、フィードバック制御、ならびに腫瘍性または代謝ストレス条件下での経路再配線の機構的検討を支えます。

IRS-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIRS4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IRS4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IRS4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRS-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRS-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IRS4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRS-4の機能に不可欠なIRS4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IRS4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRS-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIRS-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IRS4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRS-4 HDRプラスミド（h）および IRS-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIRS4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIRS4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。