IRG1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421149-ACT

Das murine Gen **Acod1** kodiert das **immune-responsive gene 1 (IRG1)**, ein mitochondriales Enzym, das durch Toll-like-Rezeptor- und Interferon-Signalwege in aktivierten Makrophagen und anderen myeloiden Zellen induziert wird. IRG1 katalysiert die Bildung von **Itaconat**, einem Metaboliten, der den zellulären Immunstoffwechsel umprogrammiert, indem er den Citratzyklus (TCA-Zyklus) moduliert, die **Succinatdehydrogenase** hemmt und reaktive Sauerstoffspezies sowie **NRF2**-abhängige antioxidative Programme beeinflusst. Über diese Signalwege verknüpft Acod1 die inflammatorische Aktivierung mit einer metabolischen Neuverkabelung, die die Zytokinproduktion und antimikrobielle Zustände beeinflusst. Eine dysregulierte IRG1–Itaconat-Signalgebung wurde mit veränderten angeborenen Immunantworten in Kontexten wie Infektion, chronischer Entzündung und Modellen immunvermittelter Gewebeschädigung in Verbindung gebracht.

IRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Acod1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Acod1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Acod1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IRG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Acod1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IRG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IRG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Acod1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.