IRF-7 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400450-NIC

インターフェロン調節因子7（IRF7）は、RIG-I様受容体やToll様受容体などのパターン認識受容体の下流で働くI型インターフェロン応答のマスター転写制御因子であるIRF-7をコードする。ウイルス核酸の感知によって活性化されると、IRF-7はリン酸化されて核内へ移行し、IFN-α/βおよびインターフェロン刺激遺伝子の発現を誘導することで、自然抗ウイルス免疫と炎症性シグナル伝達を形成する。IRF7はTBK1/IKKεを介したシグナルを統合し、NF-κBと協調して、免疫細胞の活性化や抗原提示に影響するサイトカインネットワークを調整する。IRF7活性の破綻は、抗ウイルス防御の変化や、免疫介在性疾患および炎症関連病態で観察される異常なインターフェロン・シグネチャーと関連づけられており、インターフェロン経路制御の機序研究における一般的な標的となっている。

IRF-7 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IRF7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IRF7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IRF7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IRF7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。