Plásmido CRISPR de Activación (m) IRF-7: sc-424785-ACT

El gen Irf7 de ratón codifica IRF-7, un regulador transcripcional maestro de las respuestas de interferón de tipo I que coordina la inmunidad innata antiviral aguas abajo de receptores de reconocimiento de patrones, como los receptores tipo RIG-I y los receptores tipo Toll (TLR). Tras su activación, IRF-7 integra señales derivadas de la fosforilación dependiente de TBK1/IKKε y de su translocación nuclear para impulsar programas de genes estimulados por interferón a través del eje JAK–STAT. La actividad de Irf7 modula la señalización inflamatoria, las respuestas de células dendríticas y macrófagos, y el diálogo cruzado con redes de citocinas mediadas por NF-κB. Las firmas de interferón dependientes de IRF-7 desreguladas son relevantes en modelos de susceptibilidad viral, inflamación crónica y patología tipo autoinmune, lo que respalda estudios mecanísticos de procesos patológicos impulsados por interferón.

IRF-7 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Irf7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IRF-7 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Irf7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Irf7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRF-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Irf7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRF-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRF-7 en células tumorales con expresión de Irf7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.