IRF-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400920-ACT

O IRF5 codifica o fator regulador de interferon 5 (IRF-5), um fator de transcrição que coordena programas gênicos da imunidade inata e da inflamação a jusante de receptores de reconhecimento de padrões e da sinalização por citocinas. O IRF-5 contribui para respostas de interferon do tipo I, redes transcricionais associadas ao NF-κB e a polarização de macrófagos/células dendríticas por meio da regulação de genes estimulados por interferon e de citocinas pró-inflamatórias. Alterações na atividade do IRF5 têm sido associadas à desregulação da sinalização imune na autoimunidade sistêmica e em fenótipos inflamatórios crônicos, tornando-o um alvo frequentemente estudado em imunogenética e defesa do hospedeiro. Em células humanas, a função do IRF-5 é comumente investigada em vias relacionadas à sinalização de receptores Toll-like, respostas antivirais e controle transcricional da produção de citocinas.

IRF-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-5 em células tumorais com expressão de IRF5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.