IP3KA Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404638-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IP3KAO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase IP3KA (h) e o Plasmídeo Double Nickase IP3KA (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ITPKA. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IP3KA Anticorpo (F-3): sc-271838
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IP3KA Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404638-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3KA Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404638-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O ITPKA humano codifica a inositol-trifosfato 3-quinase A (IP3KA), uma enzima regulada por Ca2+/calmodulina que fosforila o inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) para gerar IP4, moldando assim a dinâmica da sinalização de cálcio intracelular. Ao modular a liberação de Ca2+ dependente de IP3 a partir do retículo endoplasmático, a IP3KA influencia a função sináptica, a remodelação do citoesqueleto e programas de sinalização dependentes de atividade, incluindo vias que acoplam transientes de cálcio a respostas transcricionais. Em neurônios, a IP3KA é enriquecida em espinhas dendríticas e tem sido associada a mecanismos subjacentes à plasticidade e à excitabilidade por meio da regulação de efetores sensíveis a Ca2+. Alterações no balanço IP3/IP4 e na homeostase de cálcio associadas à desregulação de ITPKA são relevantes para a neurobiologia e também têm sido investigadas em contextos de sinalização aberrante e fenótipos de migração em modelos de doença.
IP3KA O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITPKA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITPKA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITPKA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITPKA interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.