IP-10 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421031-ACT

Das murine Gen **Cxcl10** kodiert das durch Interferon-γ induzierte Protein 10 (IP-10/CXCL10), ein CXC-Chemokin, das überwiegend über **CXCR3** signalisiert und die Chemotaxis sowie die Positionierung aktivierter T-Zellen, NK-Zellen und weiterer Leukozytensubpopulationen reguliert. Seine Expression wird stark nachgeschaltet von IFN-γ- und Pattern-Recognition-Rezeptor-Signalwegen induziert und integriert dabei JAK/STAT- und NF-κB-gekoppelte Entzündungsprogramme, die die Immunüberwachung in Geweben prägen. IP-10 trägt zur Koordination des Leukozyten-Traffickings, zur Endothelaktivierung und zur Verstärkung von Zytokinnetzwerken bei Infektionen und steriler Entzündung bei. Eine fehlregulierte CXCL10-Signalgebung wird häufig in Modellen für Autoimmunität, Neuroinflammation und Tumor‑Immun‑Interaktionen untersucht, in denen eine veränderte Rekrutierung von Immunzellen zur Pathologie beiträgt.

IP-10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cxcl10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IP-10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cxcl10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cxcl10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IP-10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cxcl10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IP-10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IP-10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cxcl10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.