Integrin αX/ITGAX/CD11c Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401765-ACT

ITGAX codifica a integrina αX (CD11c), uma subunidade α que forma um heterodímero com a integrina β2 (CD18) para constituir o receptor de complemento 4 (CR4), um receptor-chave de adesão e fagocitose em células da linhagem mieloide. O CD11c media interações célula–célula e célula–matriz, o tráfego de leucócitos e o reconhecimento dependente de complemento de alvos opsonizados por iC3b, integrando sinais da ativação “inside-out” das integrinas para regular a remodelação do citoesqueleto e a formação da sinapse imune. Por meio de crosstalk coordenado com a sinalização de receptores Fc e redes de quinases a jusante, o ITGAX influencia a captação de antígenos, a maturação de células dendríticas e programas de citocinas inflamatórias. A expressão desregulada de ITGAX ou a abundância de células CD11c+ é frequentemente usada para estratificar a infiltração imune e estados de ativação mieloide em câncer, inflamação autoimune e cenários de infeções crônicas, apoiando estudos mecanísticos da biologia de doenças impulsionada por células mieloides.

Integrin αX/ITGAX/CD11c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGAX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin αX/ITGAX/CD11c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGAX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGAX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin αX/ITGAX/CD11c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGAX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin αX/ITGAX/CD11c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin αX/ITGAX/CD11c em células tumorais com expressão de ITGAX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.