Integrin αM/CD11b Double Nickaseプラスミド (h): sc-400563-NIC

ヒトのITGAMはインテグリンαM（CD11b）をコードしており、ITGB2とヘテロ二量体を形成してMac-1/CR3となる。Mac-1/CR3は白血球の接着分子であり補体受容体でもあり、自然免疫機能の中核を担う。CD11bはICAMとの相互作用を介して強固な接着および血管内皮通過（トランスエンドセリアル・マイグレーション）を仲介し、iC3bでオプソニン化された標的の貪食を支持するとともに、アクチンの再編成や炎症性遺伝子プログラムを形作るアウトサイドインシグナルにも寄与する。これらの働きは、インテグリンシグナル伝達、Fc受容体とのクロストーク、ならびに好中球・単球・マクロファージや一部の樹状細胞サブセットといった骨髄系細胞におけるケモカイン誘導性の細胞移動と連動している。CD11b依存的な接着やエフェクターシグナルの破綻は、炎症や自己免疫、感染症の病態形成、さらに腫瘍関連免疫微小環境における骨髄系細胞の挙動の文脈でしばしば検討されている。

Integrin αM/CD11b ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGAM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGAM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGAMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGAMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。