Plásmido CRISPR de Activación (m2) Integrin αE/ITGAE/CD103: sc-421166-ACT-2

El gen murino Itgae codifica la integrina αE (CD103), un receptor de adhesión integrina αEβ7 que se une a la E-cadherina para favorecer la retención y el posicionamiento de linfocitos residentes en tejidos, en particular linfocitos T CD8⁺ y linfocitos T reguladores, dentro de compartimentos epiteliales y mucosos. ITGAE participa en la señalización mediada por integrinas y en la remodelación del citoesqueleto, influyendo en la formación de la sinapsis inmunológica, la migración y la vigilancia inmunitaria local en tejidos de barrera. La expresión alterada de CD103 se utiliza con frecuencia para delimitar estados inmunitarios residentes en tejidos y se ha implicado en mecanismos de inflamación crónica, interacciones tumor–inmunidad y respuestas inmunitarias relacionadas con trasplantes en modelos experimentales. La edición génica de Itgae en ratón respalda estudios sobre el tráfico de leucocitos, la comunicación cruzada entre epitelio y células inmunitarias, y el análisis funcional de vías dependientes de αEβ7 mediante fenotipado por citometría de flujo, ensayos de homing in vivo y perfiles de residencia tisular.

Integrin αE/ITGAE/CD103 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Itgae sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αE/ITGAE/CD103 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Itgae en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Itgae, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αE/ITGAE/CD103. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Itgae y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αE/ITGAE/CD103 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αE/ITGAE/CD103 en células tumorales con expresión de Itgae silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.