Integrin αE/ITGAE/CD103 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404333-ACT

ITGAE codifica a integrina αE (CD103), que se associa à integrina β7 para formar o heterodímero αEβ7, o qual se liga à E-caderina e promove a adesão e a retenção de linfócitos em tecidos epiteliais. Esse receptor é proeminente em células T de memória residentes no tecido, em subpopulações de células T reguladoras e em células dendríticas mucosas, sustentando a vigilância imunológica, a localização celular e a formação da sinapse imunológica. Interações dependentes de CD103 influenciam o tráfego de leucócitos, a imunidade da barreira epitelial e a sinalização inflamatória em microambientes mucosos. A expressão alterada de ITGAE/CD103 é frequentemente utilizada para estratificar estados de células imunes em contextos como inflamação intestinal, respostas imunes associadas a transplantes e fenótipos de linfócitos infiltrantes de tumores.

Integrin αE/ITGAE/CD103 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGAE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin αE/ITGAE/CD103 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGAE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGAE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin αE/ITGAE/CD103. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGAE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin αE/ITGAE/CD103 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin αE/ITGAE/CD103 em células tumorais com expressão de ITGAE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.