Integrin β8/ITGB8CRISPR激活质粒(m): sc-435838-ACT

Itgb8 编码整合素 β8（integrin β8），它是一种 β 亚基，可与 αv 配对形成 αvβ8 受体。该受体是细胞表面黏附分子，负责将细胞外基质（ECM）配体与细胞骨架及信号网络连接起来。在小鼠组织中，ITGB8 参与细胞迁移、组织重塑以及上皮—间充质之间的通讯；并且通过与 ECM 相关复合物的相互作用，作为潜在型 TGF-β 激活的关键调控因子。通过与黏着斑信号以及 TGF-β/SMAD 通路的串扰，ITGB8 影响细胞分化程序、屏障特性和免疫细胞行为。多项临床前与转化研究表明，ITGB8 活性失调与纤维化性重塑、炎症性微环境以及肿瘤生物学相关，支持其作为进行通路机制解析的关键节点工具靶点。

Integrin β8/ITGB8 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Itgb8的表达。

Integrin β8/ITGB8 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Itgb8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Itgb8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Integrin β8/ITGB8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Itgb8位点，并能够研究内源性位点上依赖于Integrin β8/ITGB8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Itgb8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Integrin β8/ITGB8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。