Integrin α8/ITGA8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402020-ACT

ITGA8 codifica a integrina α8, uma subunidade α que forma um heterodímero com a β1 para constituir um recetor de ligação à laminina e à matriz extracelular, o qual regula a adesão célula–matriz, a organização do citoesqueleto e a mecanotransdução. A integrina α8/ITGA8 contribui para a sinalização das adesões focais e para vias a jusante envolvendo FAK/SRC, GTPases da família Rho e MAPK, que coordenam a migração celular, a diferenciação e a remodelação tecidular. É amplamente estudada em contextos mesenquimatosos e estromais, incluindo o desenvolvimento renal e a biologia de fibroblastos, onde alterações na sinalização mediada por integrinas podem influenciar a deposição de matriz extracelular e a morfogénese dos órgãos. A expressão desregulada de ITGA8 ou a sinalização por integrinas tem sido associada a fenótipos fibróticos e à remodelação do microambiente tumoral, tornando-a relevante para investigações sobre invasão, sobrevivência dependente de adesão e programas transcricionais induzidos pela matriz.

Integrin α8/ITGA8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α8/ITGA8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α8/ITGA8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α8/ITGA8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α8/ITGA8 em células tumorais com expressão de ITGA8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.