Integrin α6/ITGA6/CD49f Double Nickaseプラスミド (h): sc-400380-NIC

ITGA6 はインテグリンα6（CD49f）をコードしており、主にβ1またはβ4と対を成してラミニン結合性受容体を形成し、細胞-細胞外マトリックス間の接着を担うαサブユニットである。インテグリンα6複合体は、フォーカルアドヒージョンおよびヘミデスモソーム関連のシグナル伝達を統合して制御し、FAK/SRC、PI3K–AKT、MAPK などの経路を介して上皮の極性、遊走、生存を調節する。CD49f は上皮系前駆細胞や幹細胞様コンパートメントに関連するマーカーとして広く用いられており、組織構築やニッチとの相互作用の維持における役割を反映している。ITGA6 の発現異常やインテグリンシグナルの変調は、複数の腫瘍において浸潤、転移性播種、治療抵抗性といった表現型と関連するほか、α6β4 依存的なアンカリング構造を介した基底膜・皮膚の水疱形成の生物学にも関与する。

Integrin α6/ITGA6/CD49f ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。