Integrin α6/ITGA6/CD49f CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400380-ACT

ITGA6 kodiert Integrin α6 (CD49f), eine α‑Untereinheit, die sich vor allem mit β1 oder β4 paart und so lamininbindende Rezeptoren bildet, die die Zell–Extrazellulärmatrix-Adhäsion organisieren. Über Fokaladhäsions-Signalwege und Integrin-gekoppelte Kinase(ILK)-Signalwege regulieren α6-haltige Integrine die Zytoskelettdynamik, Zellpolarität, Migration und das Überleben und beeinflussen damit das Verhalten epithelialer sowie Stamm-/Vorläuferzellen. ITGA6 wird häufig als Marker basaler epithelialer Kompartimente und gewebsresidenter Vorläuferzellen verwendet, und eine veränderte Integrin‑α6‑Signalgebung wird in verschiedenen Krankheitskontexten mit Änderungen in Invasivität, Differenzierungszustand und Interaktionen mit der Mikroumgebung in Verbindung gebracht. Seine Funktionen bei der Bildung von Hemidesmosomen und der Anbindung an die Basalmembran machen es zu einem häufigen Ziel in Studien zur Gewebearchitektur, Wundheilung und metastaseassoziierten Phänotypen.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α6/ITGA6/CD49f-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α6/ITGA6/CD49f-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α6/ITGA6/CD49f-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.