Integrin β4/ITGB4/CD104CRISPR激活质粒(h): sc-400573-ACT

ITGB4 编码整合素 β4（CD104），是一种跨膜黏附受体，通常与整合素 α6 配对形成 α6β4。α6β4 是半桥粒（hemidesmosomes）的关键组成部分，可将上皮细胞锚定在富含层粘连蛋白（laminin）的基底膜上。通过与中间丝的耦联，并与黏着斑及生长因子信号通路发生串扰，ITGB4 调控上皮细胞的极性、迁移、生存与机械信号转导，并进一步影响 PI3K–AKT、MAPK 以及细胞骨架重塑等下游通路。ITGB4 的表达水平或定位发生改变与细胞—基质黏附受损、侵袭性增强以及多种疾病情境中的上皮屏障重塑相关。由于 α6β4 能将细胞外基质线索与细胞内信号整合起来，它被广泛用于研究依赖黏附的信号转导、与 EMT 相关的程序以及肿瘤微环境相互作用。

Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ITGB4的表达。

Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ITGB4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ITGB4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Integrin β4/ITGB4/CD104表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ITGB4位点，并能够研究内源性位点上依赖于Integrin β4/ITGB4/CD104的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ITGB4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Integrin β4/ITGB4/CD104通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。