Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401336-NIC

ITGA4 codifica a integrina α4 (CD49d), um recetor de adesão que se associa às subunidades β1 ou β7 para formar os heterodímeros α4β1 e α4β7, que regulam o tráfego de leucócitos, a adesão firme e a migração transendotelial. Ao ligar-se a ligandos como VCAM1 e fibronectina, a integrina α4 coordena sinalização “outside-in” que se articula com a remodelação do citoesqueleto e vias de sobrevivência, incluindo sinalização de adesão focal, PI3K–AKT e MAPK. A atividade de ITGA4 contribui para o posicionamento de células imunitárias nos tecidos e influencia microambientes inflamatórios ao modular interações célula–célula e célula–matriz. A adesão e migração dependentes de integrina α4 desreguladas têm sido implicadas em condições inflamatórias crónicas e na biologia de neoplasias hematológicas, sustentando a sua utilização como alvo de investigação em estudos de interações entre o sistema imunitário e o estroma tumoral.

Integrin α4/ITGA4/CD49d O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGA4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGA4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGA4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGA4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.