Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401336-ACT

ITGA4 codifica a integrina α4 (CD49d), uma subunidade α que se associa às subunidades β1 ou β7 para formar as integrinas VLA-4 (α4β1) ou α4β7, que medeiam a adesão célula–célula e célula–matriz. Ao ligar-se a VCAM1, à fibronectina CS-1 e a MAdCAM1, a integrina α4 regula o tráfego de leucócitos, a adesão firme e a migração transendotelial, integrando a sinalização “outside-in” com a remodelação do citoesqueleto. A sinalização associada a ITGA4 cruza-se com vias de adesão focal, MAPK e PI3K para influenciar a sobrevivência, a ativação e o comportamento migratório em compartimentos imunes e estromais. Alterações na expressão ou na função de ITGA4 são comumente investigadas em estudos de recrutamento de células inflamatórias, infiltração tecidual associada a autoimunidade e interações tumor–microambiente envolvendo disseminação metastática e posicionamento de células imunes.

Integrin α4/ITGA4/CD49d O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α4/ITGA4/CD49d O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α4/ITGA4/CD49d. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α4/ITGA4/CD49d no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α4/ITGA4/CD49d em células tumorais com expressão de ITGA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.