Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401336-ACT

ITGA4 kodiert Integrin α4 (CD49d), eine α‑Untereinheit, die mit β1 oder β7 zu den Integrinen VLA‑4 (α4β1) bzw. α4β7 dimerisiert, welche Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Adhäsion vermitteln. Durch Bindung an VCAM1, Fibronectin CS‑1 und MAdCAM1 reguliert Integrin α4 den Leukozytenverkehr, feste Adhäsion und die transendotheliale Migration und verknüpft dabei Outside‑in‑Signalgebung mit zytoskelettalem Umbau. Die ITGA4‑abhängige Signalweiterleitung überschneidet sich mit Fokaladhäsion‑, MAPK‑ und PI3K‑Signalwegen und beeinflusst so Überleben, Aktivierung und Migrationsverhalten in Immun‑ und Stromakompartimenten. Veränderte ITGA4‑Expression oder ‑Funktion wird häufig in Studien zur Rekrutierung entzündlicher Zellen, zur autoimmunassoziierten Gewebeinfiltration sowie zu Tumor‑Mikroumgebungs‑Interaktionen untersucht, die metastatische Ausbreitung und die Positionierung von Immunzellen betreffen.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α4/ITGA4/CD49d-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α4/ITGA4/CD49d-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α4/ITGA4/CD49d-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.