Integrin α3/ITGA3/CD49c Double Nickaseプラスミド (h): sc-400841-NIC

ITGA3 はインテグリンα3（CD49c）をコードしており、主にインテグリンβ1とヘテロ二量体を形成して、ラミニン結合受容体として機能し、細胞外マトリックスをアクチン細胞骨格へ連結します。この接着複合体は、FAK/Src、PI3K–AKT、MAPK などの経路を介したフォーカルアドヒージョン動態、細胞極性、ならびに外部刺激からのシグナル伝達（outside-in signaling）を制御し、その結果として細胞の移動、生存、上皮—間葉相互作用に影響を及ぼします。インテグリンα3は基底膜の構築と上皮組織の恒常性維持に重要であり、ITGA3 活性の変化は、浸潤性細胞挙動、線維化に関連するリモデリング、創傷修復プログラムの破綻と関連づけられています。生物医学研究では、ITGA3 は、細胞—マトリックス間コミュニケーション、メカノトランスダクション、ならびに上皮および腫瘍微小環境モデルにおけるラミニン依存的な輸送・形態形成を解明するために、一般的に解析対象とされています。

Integrin α3/ITGA3/CD49c ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。