ING2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404193-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ING2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ING2ダブルニカースプラスミド（h）およびING2ダブルニカースプラスミド（h2）は、ING2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ING2 抗体 (B-5): sc-271544
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ING2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404193-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ING2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404193-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ING2（inhibitor of growth family member 2）は、クロマチン結合性の腫瘍抑制タンパク質をコードしており、PHDフィンガーを介したエピジェネティック・リーダーとして機能します。具体的にはH3K4me3を認識し、ヒストン修飾の情報を転写の結果へと結び付けます。ING2は、p53依存性プログラムを調節し、クロマチンのアクセス性に影響するヒストンのアセチル化／脱アセチル化複合体と協調することで、DNA損傷応答や細胞周期制御に関与します。これらの作用を通じて、ING2はアポトーシス、細胞老化、ゲノム安定性を制御する経路に影響を与えます。ING2の発現や機能の変化は、クロマチンリモデリングの異常と関連するとされ、複数のがん関連状況で報告されていることから、エピジェネティック制御の機構研究における有用な結節点（ノード）となります。
ING2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ING2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ING2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ING2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ING2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。