INCENP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403186-ACT

INCENP（inner centromere protein：内側セントロメアタンパク質）は、体細胞分裂期の染色体整列、紡錘体組立チェックポイント（SAC）のシグナル伝達、および細胞質分裂を協調的に制御するクロモソーム・パッセンジャー複合体（CPC）の中核構成因子である。INCENPはAurora Bキナーゼ、Survivin（BIRC5）、Borealin（CDCA8）との機能的な連携を通じて、キネトコア—微小管結合の制御、ヒストンH3のリン酸化、ならびに誤った紡錘体相互作用の修正を調節する。したがって、INCENPの適切な活性は、細胞分裂における正確な染色体分配とゲノム安定性の維持に不可欠である。CPCシグナルの制御異常は、異数性や増殖性の表現型と関連し、がん生物学をはじめとする染色体不安定性に関わる状況で重要となる。

INCENP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性INCENPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

INCENP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における INCENP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はINCENP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性INCENPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のINCENP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるINCENP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびINCENP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるINCENP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。