Plásmido CRISPR de Activación (h) IMPDH2: sc-410835-ACT

El IMPDH2 humano codifica la inosina monofosfato deshidrogenasa 2, una enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis *de novo* de nucleótidos de guanina que convierte IMP en XMP y ayuda a mantener los reservorios celulares de GTP. Al controlar la disponibilidad de nucleótidos, IMPDH2 sostiene la síntesis de ADN/ARN, la biogénesis de ribosomas y la proliferación, vinculándose con programas de remodelación metabólica que acompañan la activación inmunitaria y el crecimiento oncogénico. La actividad de IMPDH2 se interrelaciona con el metabolismo de purinas y con vías más amplias de homeostasis de nucleótidos que influyen en las respuestas al estrés de replicación y en la capacidad transcripcional. Se han descrito cambios en la expresión o dependencia de IMPDH2 en diversos cánceres y en contextos de expansión de células inmunitarias e inflamatorias, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la regulación metabólica del estado celular.

IMPDH2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IMPDH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IMPDH2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IMPDH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IMPDH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IMPDH2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IMPDH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IMPDH2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IMPDH2 en células tumorales con expresión de IMPDH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.