Plasmide Double Nickase (h) IL-4: sc-402914-NIC

L’IL4 humain code l’interleukine-4 (IL-4), une cytokine pléiotrope au cœur des réponses immunitaires de type 2 et de la différenciation des lymphocytes T CD4+ naïfs vers la lignée Th2. L’IL-4 signale principalement via des complexes récepteurs contenant IL-4Rα, activant JAK1/JAK3 et STAT6, ce qui déclenche des programmes transcriptionnels favorisant la commutation isotypique des lymphocytes B vers l’IgE, la polarisation alternative (M2) des macrophages et la modulation de la fonction des cellules présentatrices d’antigène. Par des interactions avec des voies telles que PI3K–AKT et MAPK, l’IL-4 contribue à définir les niveaux de base de l’inflammation et le remodelage tissulaire dans divers microenvironnements immunitaires. Une activité IL-4/STAT6 dérégulée est largement étudiée dans le contexte de l’inflammation allergique, de l’asthme, de la dermatite atopique, de l’immunité anti-helminthes et de la polarisation immunitaire associée aux tumeurs.

IL-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IL4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IL4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IL4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IL4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.