Il-28a Plasmide Double Nickase (m2): sc-437298-NIC-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid Plasmide Double Nickase (m2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid Double Nickase Plasmid (m2) e il Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid Double Nickase Plasmid (m22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ifnl2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Il-28a Plasmide Double Nickase (m2) | sc-437298-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Nel topo, Gbp2b codifica un membro della famiglia delle proteine leganti la guanilato, implicato nell’immunità intrinseca cellulare guidata dagli interferoni, in cui contribuisce alla restrizione antimicrobica e al coordinamento della segnalazione dell’immunità innata a valle di JAK–STAT e dei programmi di geni stimolati dagli interferoni. La proteina Il-28a (nota anche come IFN-λ2) è un interferone di tipo III che segnala attraverso il complesso recettoriale IFNLR1/IL10RB per attivare risposte trascrizionali STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3), plasmando le difese antivirali epiteliali e delle mucose e modulando le reti di citochine infiammatorie. La disregolazione di queste vie è rilevante per studi sulla suscettibilità virale, l’immunità di barriera e fenotipi infiammatori cronici, inclusa l’infiammazione delle vie aeree e del tratto gastrointestinale. L’editing genetico di Gbp2b o Il-28a in modelli murini consente un’analisi meccanicistica del crosstalk degli interferoni, delle interazioni patogeno-ospite e dei programmi trascrizionali a valle, utilizzando sfide infettive, trascrittomica e profilazione delle cellule immunitarie.
Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ifnl2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ifnl2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ifnl2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ifnl2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.