IL-25 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404776-ACT

MYDGF codifica o fator de crescimento derivado de células mieloides, uma proteína secretada implicada em respostas ao estresse celular e na homeostase tecidual, enquanto a IL-25 (também conhecida como IL-17E) é uma citocina derivada de epitélio e de células imunes que promove inflamação do tipo 2. A IL-25 sinaliza por meio do complexo receptor que contém IL-17RB para ativar as vias de NF-κB e MAPK, induzindo a expressão de IL-4, IL-5 e IL-13 e moldando a imunidade da barreira mucosa. A desregulação da sinalização de IL-25 tem sido associada à inflamação alérgica e à polarização imune semelhante à observada na asma, e também é estudada no contexto do remodelamento epitelial e do crosstalk entre tumor e sistema imune. Essas vias são frequentemente investigadas em modelos de vias aéreas, intestino e pele para compreender alterações induzidas por citocinas na função de células imunes inatas e adaptativas.

IL-25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYDGF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYDGF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYDGF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-25. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYDGF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-25 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-25 em células tumorais com expressão de MYDGF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.