IL-13Rα2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-402525-LAC-2

IL13RA2 umano codifica il recettore dell’interleuchina-13 alfa 2 (IL-13Rα2), un recettore ad alta affinità per IL-13 che modula la segnalazione delle citochine di tipo 2 e può agire come recettore “esca” regolatorio, influenzando la disponibilità di IL-13 e i programmi trascrizionali a valle dipendenti da STAT6. L’espressione di IL-13Rα2 è collegata a processi che includono le interazioni epitelio-mesenchimali, il rimodellamento della matrice extracellulare e le risposte infiammatorie, con interazioni reciproche con vie che regolano la migrazione cellulare e la fibrosi tissutale. La deregolazione di IL13RA2 è frequentemente associata alla biologia tumorale e a fenotipi del microambiente immunitario, ed è stata studiata in tumori come il glioblastoma, oltre che in contesti di fibrosi e infiammazione allergica. L’editing genetico di IL13RA2 supporta studi meccanicistici sulle dinamiche della segnalazione di IL-13, sulle interazioni recettore‑ligando e su screening di genomica funzionale che valutano fenotipi guidati da citochine in modelli cellulari umani pertinenti.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-13Rα2 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IL13RA2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-13Rα2 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IL13RA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IL-13Rα2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IL13RA2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.