Plásmido Doble Nickase (h) IL-12B p40: sc-401407-NIC

IL12B codifica la subunidad p40 de IL-12B, un componente compartido de las citocinas heterodiméricas IL-12 (p35/p40) e IL-23 (p19/p40), que coordinan las respuestas inmunitarias innata y adaptativa. A través de la señalización de los receptores de IL-12 e IL-23, las citocinas que contienen p40 activan las vías JAK/STAT, promueven la polarización Th1/Th17 y sostienen programas antimicrobianos impulsados por IFN-γ y la expresión de genes inflamatorios. La expresión de IL12B en las células presentadoras de antígeno está estrictamente regulada por señales de receptores de reconocimiento de patrones, incluidas las vías de TLR y NF-κB, vinculando la detección microbiana con la producción de citocinas. La actividad desregulada de IL12B se ha implicado en la fisiopatología de la inflamación crónica y de trastornos autoinmunes, así como en alteraciones de la defensa del hospedador, por lo que es un foco frecuente de estudios mecanísticos en modelos de inmunología e inflamación.

IL-12B p40 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IL12B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IL12B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IL12B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IL12B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.