Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-12B p40: sc-401407-ACT

El gen humano **IL12B** codifica la subunidad **p40**, compartida por las citocinas heterodiméricas **IL-12 (p35/p40)** e **IL-23 (p19/p40)**, lo que sitúa a **IL12B** como un regulador central de la comunicación inmunitaria entre la inmunidad innata y la adaptativa. La señalización dependiente de p40 a través de los complejos **IL-12R** e **IL-23R** activa las vías **JAK/STAT**, moldeando la polarización **Th1** y **Th17**, la inducción de **interferón-γ** y las redes de citocinas inflamatorias en células mieloides y linfoides. Las alteraciones en la expresión de **IL12B** o los desequilibrios de esta vía se han vinculado con una defensa del huésped desregulada y con fenotipos inflamatorios crónicos, por lo que resulta relevante para estudios de biología de infecciones, inflamación granulomatosa y patología inmunitaria impulsada por citocinas. Este gen se evalúa con frecuencia en modelos de activación de macrófagos y células dendríticas, así como en sistemas de co-cultivo que miden la diferenciación de células T y su función efectora.

IL-12B p40 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IL12B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-12B p40 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IL12B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IL12B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-12B p40. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IL12B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-12B p40 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-12B p40 en células tumorales con expresión de IL12B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.