Plásmido CRISPR de Activación (h) IKK-ε: sc-401786-ACT

IKBKE codifica IKK-ε, una quinasa de IκB no canónica que integra el reconocimiento inmunitario innato con programas transcripcionales inflamatorios. IKK-ε fosforila intermediarios clave de señalización para promover la activación de IRF3/IRF7 y la expresión génica dependiente de NF-κB, modulando las respuestas de interferón de tipo I y la producción de citocinas. Mediante el crosstalk con vías aguas abajo de los TLR, los receptores tipo RIG-I y STING, IKK-ε influye en las defensas antivirales, la supervivencia celular y la señalización asociada al estrés metabólico. La actividad desregulada de IKBKE se ha vinculado a estados inflamatorios persistentes y se ha estudiado en el contexto de redes de señalización asociadas a tumores y de la remodelación del microambiente inmunitario.

IKK-ε El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IKBKE sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IKK-ε El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IKBKE en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IKBKE, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IKK-ε. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IKBKE y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IKK-ε en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IKK-ε en células tumorales con expresión de IKBKE silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.