IKK alpha Plasmide Double Nickase (h): sc-400492-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IKK alpha Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IKK alpha Double Nickase Plasmid (h) e il IKK alpha Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHUK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IKK alpha Antibody (B-8): sc-7606
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IKK alpha Plasmide Double Nickase (h) | sc-400492-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IKK alpha Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400492-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHUK codifica IKK alfa (IKKα), una subunità catalitica del complesso della chinasi IκB che regola la segnalazione di NF-κB attraverso un controllo della stabilità di IκB dipendente dalla fosforilazione e dei programmi trascrizionali a valle. Oltre all’attivazione canonica di NF-κB, IKKα svolge un ruolo di primo piano nella segnalazione non canonica di NF-κB tramite il processamento di NF-κB2 p100 in p52, influenzando l’organogenesi dei tessuti linfoidi, la maturazione delle cellule B e l’espressione di geni infiammatori. IKKα interagisce anche con vie che governano la sopravvivenza cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress, collegando l’attività di CHUK a una regolazione della proliferazione e dell’apoptosi dipendente dal contesto. L’attività deregolata dell’asse IKKα/NF-κB è spesso oggetto di studio nella biologia tumorale associata all’infiammazione, nella disregolazione immunitaria e nei meccanismi delle malattie infiammatorie croniche.
IKK alpha Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHUK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHUK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHUK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHUK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.