Partículas Lentivirales de Activación (h) IK1: sc-402139-LAC

KCNN4 codifica el canal de K+ IK1 (KCa3.1), activado por Ca2+ y de conductancia intermedia, una proteína de membrana que acopla las señales intracelulares de calcio al eflujo de potasio y a la hiperpolarización de la membrana. Al moldear el potencial de membrana y la entrada de calcio, IK1 influye en procesos como la regulación del volumen celular, el transporte epitelial de electrolitos y la señalización dependiente de activación en células inmunitarias. La actividad de KCNN4/IK1 se entrecruza con vías dependientes de Ca2+ que modulan la proliferación, la migración y las respuestas de citocinas, lo que la hace relevante para estudios de inflamación y remodelación tisular. Las alteraciones en la función de IK1 se han asociado con cambios patológicos en la biología vascular, de las vías respiratorias y del sistema inmunitario, lo que respalda su uso como diana mecanística en modelos de enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral IK1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KCNN4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IK1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KCNN4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IK1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KCNN4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.