IFITM3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403281-ACT

A proteína transmembranar induzida por interferão 3 (IFITM3) é o produto de um gene estimulado por interferão que se localiza predominantemente nas membranas endossomais e lisossomais, onde restringe a entrada de uma ampla gama de vírus envelopados. Ao alterar as propriedades e o tráfego de membranas, a IFITM3 modula a captação endocítica e eventos de fusão a jusante da sinalização imunitária inata, incluindo as vias de interferão dos tipos I e III. Variações na expressão ou na função da IFITM3 têm sido associadas a diferenças na suscetibilidade e na gravidade de infeções virais respiratórias, o que a torna um alvo frequentemente estudado que liga as respostas ao interferão ao controlo da entrada na célula hospedeira. A IFITM3 também é investigada no contexto da sinalização inflamatória e das respostas ao stress celular que remodelam a dinâmica das membranas e o transporte vesicular.

IFITM3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFITM3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFITM3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFITM3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFITM3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFITM3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFITM3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFITM3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFITM3 em células tumorais com expressão de IFITM3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.