IFI-35 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406072-ACT

O IFI35 humano codifica a IFI-35, uma proteína estimulada por interferon que modula a sinalização imune inata e programas de defesa antiviral a jusante dos interferons do tipo I. A IFI-35 está associada à regulação de respostas transcricionais inflamatórias, incluindo vias que convergem para a expressão de ISGs dirigida por JAK/STAT e a comunicação cruzada com a sinalização de receptores de reconhecimento de padrões. Alterações na expressão de IFI35 têm sido observadas em contextos de inflamação crônica, respostas a infecções virais e fenótipos imunes associados a tumores, nos quais pode influenciar redes de citocinas e interações entre células imunes. Como resultado, o IFI35 é frequentemente estudado como um nó que conecta respostas a interferon a mudanças de estado celular, como adaptação ao estresse e controle do crescimento mediado pelo sistema imune.

IFI-35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFI35 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFI-35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFI35 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFI35, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFI-35. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFI35 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFI-35 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFI-35 em células tumorais com expressão de IFI35 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.