IDO Double Nickaseプラスミド (h): sc-400495-NIC

ヒトIDO1は、ヘム依存性酵素であるインドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼ（IDO）をコードしており、キヌレニン経路に沿ったトリプトファン分解の最初の段階かつ律速段階を触媒する。IDO1は局所のトリプトファン濃度を低下させ、免疫調節作用をもつキヌレニン代謝物を産生することで、免疫恒常性を形成し、T細胞および抗原提示細胞の機能に影響を与えるとともに、炎症性シグナル伝達ネットワークとも交差する。IDO1活性は、がん、慢性感染、自己免疫関連炎症など、多様な病的状況における免疫回避や免疫寛容プログラムと関連づけられてきた。代謝チェックポイントとしてのIDO1は、レドックスバランス、ストレス応答、ならびに代謝と免疫調節のクロストークにおける役割の観点から、しばしば研究対象となっている。

IDO ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IDO1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IDO1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IDO1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IDO1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。