IDH1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401159-NIC

イソクエン酸脱水素酵素1（IDH1）は、細胞質／ペルオキシソームに局在するNADP⁺依存性酵素で、イソクエン酸を酸化的脱炭酸反応によりα-ケトグルタル酸へ変換し、酸化還元恒常性および生合成代謝を支えるNADPHを産生します。α-ケトグルタル酸の利用可能量を制御することを通じて、IDH1は脂質合成、細胞の抗酸化能、ならびにエピジェネティック制御に関与するα-ケトグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼの活性に影響します。IDH1機能の変化は、代謝の再配線やクロマチン状態の破綻と関連しており、なかでも2-ヒドロキシグルタル酸を産生してDNA／ヒストン脱メチル化を攪乱する、よく知られた新規機能獲得（ネオモルフィック）変異が含まれます。これらの特性により、IDH1は代謝とエピジェネティクスの連関、酸化ストレス応答、そしてヒト細胞における状況依存的な脆弱性を研究する上での中核的ノードとなっています。

IDH1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IDH1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IDH1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IDH1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IDH1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。