IDE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421021

概要

インスリン分解酵素（IDE）は亜鉛依存性メタロプロテアーゼであり、インスリンやその他の小型ペプチドの細胞内外でのタンパク質分解を担うことで、ペプチドの代謝回転やシグナル伝達の持続時間の調節に寄与します。マウス組織では、IDE活性はインスリン／IGFシグナル伝達、エンドソーム輸送、ならびに代謝恒常性やストレス応答を形作るプロテオスタシス経路と連携しています。IDEの発現や機能の変化は、グルコース処理やペプチドクリアランスの破綻と関連づけられており、代謝表現型や神経変性に伴うペプチド蓄積に関連するモデルで頻繁に研究されています。そのため、Ideは、ペプチド分解が細胞内シグナルネットワークや凝集しやすいタンパク質の生物学にどのように影響するかを解明するうえで有用な遺伝学的ノードです。

IDE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるIde遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ide内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ideのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IDEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IDEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ide欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IDEの機能に不可欠なIdeエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ideゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IDE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIDE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ide遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IDE HDRプラスミド（m）および IDE HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIdeホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIde標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。