ICMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406029

概要

ICMT（イソプレニルシステイン・カルボキシルメチル基転移酵素）は小胞体に局在する酵素で、CAAXタンパク質のC末端にあるプレニル化システイン残基がプロテオリシスを受けた後に、メチルエステル化を触媒します。これはタンパク質プレニル化の最終段階にあたります。この修飾は、小型GTPアーゼや関連するシグナル伝達タンパク質の膜結合性や細胞内輸送（サブセルラートラフィッキング）を調整し、RAS/MAPK、PI3K–AKT、ならびに細胞骨格制御などの経路に影響を与えます。プレニル化基質の局在と活性を制御することで、ICMTは細胞増殖、極性、そして小胞輸送の制御に寄与します。プレニル化の動態変化やICMT依存的なプロセシングの異常は、がん化シグナルなど、局在異常を起こしたプレニル化タンパク質が細胞恒常性を乱す疾患との関連が示されています。

ICMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるICMT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ICMT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ICMTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ICMTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ICMTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ICMT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ICMTの機能に不可欠なICMTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ICMTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ICMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびICMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ICMT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ICMT HDRプラスミド（h）および ICMT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはICMTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のICMT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。