ICAM-1/CD54 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400098-ACT

ICAM1 codifica la molecola di adesione intercellulare-1 (ICAM-1/CD54), un recettore inducibile della superfamiglia delle immunoglobuline espresso su cellule endoteliali ed epiteliali e su molti leucociti. ICAM-1 si lega alle integrine β2, come LFA-1 (ITGAL/ITGB2) e Mac-1 (ITGAM/ITGB2), per mediare un’adesione stabile, la migrazione transendoteliale e la formazione di sinapsi immunologiche. La sua espressione è fortemente aumentata da segnali infiammatori, tra cui TNF-α e IL-1, tramite programmi dipendenti da NF-κB e MAPK, collegando ICAM1 al traffico leucocitario e all’infiammazione vascolare. Un’attività e un’espressione deregolate di ICAM1 sono associate a stati infiammatori cronici, patologie autoimmuni, processi aterosclerotici e interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendolo un nodo utile per studiare l’adesione cellulare e la segnalazione guidata dalle citochine.

ICAM-1/CD54 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ICAM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ICAM-1/CD54 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ICAM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ICAM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ICAM-1/CD54. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ICAM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ICAM-1/CD54 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ICAM-1/CD54 nelle cellule tumorali con espressione di ICAM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.