IAP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401544-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IAPO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase IAP (h) e o Plasmídeo Double Nickase IAP (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ALPI. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IAP Anticorpo (AAP.1): sc-56917
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IAP Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401544-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IAP Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401544-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O ALPI humano codifica a fosfatase alcalina intestinal (IAP), uma ectoenzima da borda em escova que desfosforila substratos luminais e contribui para a homeostase da barreira epitelial. A atividade da IAP se cruza com a regulação imune inata da mucosa ao detoxificar produtos microbianos fosforilados pró-inflamatórios e moldar as interações hospedeiro–microrganismo, influenciando assim a sinalização inflamatória a jusante no intestino. A expressão de ALPI está intimamente ligada à diferenciação de enterócitos e ao processamento de nutrientes, e a atividade alterada da IAP tem sido associada à inflamação intestinal e a fenótipos relacionados à disbiose em sistemas experimentais. Como marcador funcional do epitélio do intestino delgado, ALPI é frequentemente usado para investigar vias que governam a integridade da barreira, o reconhecimento de microrganismos e a maturação epitelial.
IAP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ALPI em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ALPI. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ALPI. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ALPI interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.