IAP Plasmide Double Nickase (h): sc-401544-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IAP Double Nickase Plasmid (h) e il IAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALPI. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IAP Antibody (AAP.1): sc-56917
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-401544-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401544-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ALPI umano codifica la fosfatasi alcalina intestinale (IAP), un ectoenzima del bordo a spazzola che defosforila i substrati presenti nel lume e contribuisce all’omeostasi della barriera epiteliale. L’attività della IAP si interseca con la regolazione dell’immunità innata della mucosa detossificando prodotti microbici fosforilati pro-infiammatori e modulando le interazioni ospite–microbo, influenzando così la segnalazione infiammatoria a valle nell’intestino. L’espressione di ALPI è strettamente legata alla differenziazione degli enterociti e alla gestione dei nutrienti, e un’attività alterata della IAP è stata associata, in sistemi sperimentali, a infiammazione intestinale e a fenotipi correlati alla disbiosi. In quanto marcatore funzionale dell’epitelio del tenue, ALPI è spesso utilizzato per indagare i circuiti che governano l’integrità della barriera, il riconoscimento dei microrganismi e la maturazione epiteliale.
IAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALPI nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALPI. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALPI. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALPI interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.