Plasmide Double Nickase (h) I1PP2A: sc-402988-NIC

ANP32A code pour I1PP2A, une phosphoprotéine nucléaire acide riche en leucines qui agit comme inhibiteur de la protéine phosphatase 2A (PP2A) et comme régulateur de processus associés à la chromatine. En modulant les événements de déphosphorylation dépendants de PP2A, I1PP2A influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l'ADN et des nœuds de signalisation qui intègrent le contrôle transcriptionnel à l'adaptation au stress cellulaire. ANP32A participe également au métabolisme de l'ARNm et aux dynamiques nucléocytoplasmiques via des interactions avec des facteurs de liaison à l'ARN et de remodelage de la chromatine. Une activité dérégulée d'ANP32A/I1PP2A a été associée dans la littérature à des phénotypes de prolifération et de survie altérés, ce qui étaye sa pertinence pour l'étude de la signalisation oncogénique et des voies neurodégénératives.

ANP32A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANP32A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANP32A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANP32A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANP32A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.