I1PP2A CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419111-ACT

マウスAnp32aはI1PP2Aをコードしており、I1PP2Aは核内に局在する酸性でロイシンに富むリン酸化タンパク質で、プロテインホスファターゼ2A（PP2A）の阻害因子および調節因子として機能し、リン酸化依存的なシグナル伝達ネットワークに影響を与えます。ANP32AはPP2Aの制御およびクロマチン関連の機能を介して、細胞周期進行、DNA損傷応答、分化やストレス適応に関連する転写プログラムの制御に寄与します。さらに、核内複合体との相互作用を通じて、アポトーシス制御や、より広範なRNAおよびタンパク質の恒常性にも関与するとされています。ANP32A/I1PP2A活性の異常やPP2Aシグナルの変化は、ホスファターゼのバランスが細胞の運命決定を左右するようながん原性キナーゼ経路、神経生物学、炎症またはストレス関連の表現型に関する研究において重要です。

ANP32A CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Anp32aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANP32A CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Anp32a 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAnp32a転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANP32Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAnp32a遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANP32A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAnp32a発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANP32A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。