Plásmido CRISPR de Activación (h) HSPC171: sc-412030-ACT

TMEM208 codifica la proteína de membrana humana HSPC171, un factor asociado al retículo endoplásmico (RE) implicado en el mantenimiento de la homeostasis del RE y en la coordinación de respuestas adaptativas al estrés proteostático y metabólico. Al influir en la organización del RE y en las señales de salida vinculadas a las vías de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), TMEM208 puede afectar procesos posteriores como el control de calidad de proteínas, el manejo de lípidos y programas transcripcionales inducidos por el estrés. La alteración de la señalización de estrés del RE y el desequilibrio de la proteostasis son rasgos recurrentes del cáncer, la neurodegeneración y los trastornos metabólicos, lo que hace que TMEM208/HSPC171 sea relevante para estudios mecanísticos que conectan la función del RE con la supervivencia celular, la diferenciación y la señalización inflamatoria. Como componente transmembrana con posibles funciones reguladoras, TMEM208 también resulta de interés para cartografiar redes residentes de orgánulos e identificar dependencias específicas del contexto entre distintos tipos celulares.

HSPC171 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM208 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HSPC171 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM208 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM208, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSPC171. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM208 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSPC171 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSPC171 en células tumorales con expresión de TMEM208 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.