HSPA6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400870-ACT

HSPA6 codifica um membro da família HSP70 induzível por estresse, que atua como uma chaperona molecular dependente de ATP para estabilizar proteínas recém-sintetizadas ou danificadas, promover o reenovelamento e evitar a agregação durante estresse proteotóxico. É rapidamente regulado para cima por choque térmico e outras agressões celulares por meio de programas transcricionais mediados por fatores de choque térmico e participa de redes de proteostase que se intersectam com a resposta a proteínas mal dobradas (UPR), a degradação via ubiquitina–proteassoma e a autofagia. Ao moldar a capacidade de controle de qualidade proteica, alterações na expressão de HSPA6 são frequentemente examinadas em contextos de estresse oxidativo, inflamação e lesão celular. A atividade de chaperonas desregulada e a proteostase comprometida são amplamente relevantes para a neurodegeneração, a adaptação de células cancerosas ao estresse e modelos de dano tecidual, tornando HSPA6 um marcador útil e também um modulador em estudos de biologia do estresse.

HSPA6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSPA6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSPA6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSPA6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSPA6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSPA6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSPA6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSPA6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSPA6 em células tumorais com expressão de HSPA6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.