HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400073-NIC

HSPA5は、ER（小胞体）常在性シャペロンであるBiP/GRP78（HSPA5）をコードしており、新生ポリペプチドに結合して凝集を防ぎ、分泌タンパク質および膜タンパク質のフォールディングとアセンブリを支える、プロテオスタシスの中核的制御因子です。アンフォールドド・プロテイン・レスポンス（UPR）の主要なセンサー／エフェクターとして、HSPA5はPERK–EIF2α、IRE1–XBP1、ATF6の各経路を介してERストレスシグナルを調節し、翻訳、品質管理、適応的な転写プログラムに影響を与えます。さらにHSPA5は、小胞体関連分解（ERAD）やカルシウム恒常性にも関与し、フォールディング能を酸化還元状態や代謝状態と結び付けます。HSPA5活性の破綻は、慢性的なプロテオトキシックストレスを特徴とする疾患（腫瘍生物学、神経変性、代謝異常、炎症状態など）と関連しており、ストレス適応の機構研究における重要なハブ分子となっています。

HSPA5/BiP/GRP78 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSPA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSPA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSPA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSPA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。