HSP 60 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400336

Visão geral

HSPD1 codifica a chaperonina mitocondrial HSP60, um componente central do sistema de chaperoninas que promove o dobramento e a montagem de proteínas codificadas no núcleo e importadas para a matriz mitocondrial. A HSP60 sustenta a proteostase mitocondrial, a capacidade de fosforilação oxidativa e as respostas ao estresse ao amortecer o mau dobramento de proteínas e limitar o dano proteotóxico. A perturbação de HSPD1 compromete o controle de qualidade mitocondrial e pode alterar a suscetibilidade à apoptose, a homeostase redox e a sinalização imune inata associada à disfunção mitocondrial. A expressão ou localização desregulada de HSP60 tem sido associada à neurodegeneração, a distúrbios cardiometabólicos e à adaptação ao estresse relacionada ao câncer, tornando-a um alvo valioso para estudos mecanísticos da sinalização mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HSP 60 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HSPD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HSPD1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HSPD1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HSP 60.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HSPD1 para a investigação da sinalização de HSP 60, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HSPD1 críticos para a função HSP 60
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HSPD1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HSP 60 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HSP 60 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HSPD1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HSP 60 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HSP 60 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HSPD1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HSPD1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.